浅论ＤＨＰＬＣ技术在基因突变检测上的应用

研究得最广泛的抑癌基因，迄今发现的人类肿瘤的2500种基因突变中，p53蛋白的393个氨基酸就有280个位点存在突变，其直接的后果是导致氨基酸的改变，最终使p53蛋白失活，丧失抑癌作用。杜明和丰有吉，利用DHPLC来检测50例散发性卵巢癌p53基因外显子5，8的突变，18例突变都可以使用DHPLC的方法发现，没有假阳性和假阴性。说明DHPLC可以用于临床筛查基因突变，并且对于异质性肿瘤而言，DHPLC检测基因突变无疑是最可靠的。
　　(2)胃癌组织基因突变鲁狲、徐惠绵、任群等人利用DHPLC对39例胃癌组织及血清中p53基因突变进行检测，并测序验证。在他们的研究中p53基因的突变率为21％(8/39)；其中肠型胃癌突变率40％(6/15)明显高于弥漫型胃癌8.33％(2/24)(P<0.01)；发现既往未见报道突变3例。这充分说明了DHPLC是一项较好的检测胃癌组织中基因突变的筛查方法
　　(3)汉族人I型多囊肾致病基因突变张树忠等人，通过采用DHPLC技术检测汉族人常染色体显性多囊肾病(AD－PKD)I型致病基因PKDl的突变：以来源于19个ADPKD家系的67名成员血样标本的基因组DNA为模板，通过长链PCR和巢式PCR联合扩增的方法扩增PKDl全编码区，然后采用DHPLC方法进行初步筛查，将存在异常色谱图的扩增产物经核苷酸测序，确定突变的具体位点和类型，共检测出14个致病突变，包括10个错义突变、1个插入突变、1个缺失突变、2个无义突变。他们实验结果充分说明了DH－PLC方法可以作为更为有效筛查汉族人ADPKDPKDl突变位点的检测途径。
　　(4)乳腺癌BRCAl基因突变BRCAl基因为“乳腺癌1号基因”，位于17q21，有22个编码外显子。目前已经发现约40％～50％的遗传性乳腺癌和卵巢癌患者BRCAl基因发生突变。李丹等利用聚合酶链反应PCR扩增BRCAl基因，该扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定后，直接进行DH－PLC分析，从124例乳腺癌患者中共发现9种突变，确定了9种乳腺癌患者可能发生的突变类型，为今后临床应用DH－PLC对高危人群BRCAI基因进行早期基因检测提供了9个位点，所有DPHLC检测显示峰型异常的样品经测序证明均存在突变或者SHP，证明该技术阳性检测率为100％。且具有操作简单、快速、敏感、准确且经济等特点。
3　DHPLC技术与其他技术在突变基因诊断中的联合应用
　　
　　目前在核酸分析领域与HPLC联用的检测手段有紫外(ultraviolet photometric detector，UV)、荧光(fluorescencedetector)、质谱(mass Spectrometry，MS)等。其中紫外检测器(UV)凭借其良好的通用性成为应用最为广泛