浅论ＤＨＰＬＣ技术在基因突变检测上的应用

的检测器，但灵敏度不高的弱点使其使用受到一定的限制。在核酸分析和一些突变扫描方法中有时需要更高的灵敏度，这时具有更高灵敏度和选择性的荧光检测器成为首选。但是荧光检测器要求使用荧光标记物，且通常使用的染料如吖啶黄、溴化乙锭是有毒物质。Scalano实验室开发出SYBR Green，染料不仅具有更好的灵敏度，而且使用更安全。激光诱导荧光是目前灵敏度最高的检测方法之一。Hecker等采用荧光标记PCR引物、激光诱导荧光方式进行检测，证明DH－PLC方法可以区别含量相差500倍的两个等位基因，这使多份样本的混合检测成为可能。同时荧光标记单链，使色谱图的解释变得更加容易。美国Transgenomie公司在WAVEOR核苷酸片段分析系统技术平台基础上，开发出一种后荧光检测技术。在所有分析条件不变的情况下，被检测的核酸片段经DHPLC分离之后在混合室中与荧光试剂混合，然后进行检测，不仅可以提高灵敏度上百倍，而且不需要昂贵的荧光标记引物。近年来电喷雾离子化一质谱(EIS－MS)作为一种重要的结构分析工具与IR－RP－HPLC联用也已应用于核酸分析领域，该联用技术不仅可以确证被分离的单链DNA的成分特性，还可以确证扩增的PCR产物的基因型。众所周知，在核酸的质谱分析中为了获得高置信度的分析结果，对分析物进行适当的脱盐和去除小分子量杂质是必不可少的，这也正是HPLC－MS的魅力所在，但质谱的高成本使该项技术较难推广使用，
　　
　　4　总结
　　
　　DHPLC用来检测DNA突变和单核酸多态性，可以取代传统分子生物学技术，不需要制备凝胶，检测DNA片段做到了全自动、高效、快速、准确，在疾病相关基因突变检测方面提供了有效的技术手段，是一种快速有效的基因突变筛查方法。DHPLC技术也有不足之处：对PCR要求很高；不能直接检测出纯合突变，只能提供个体样本有无突变的信息，但无法得出具体的突变类型；当有多个片段需要检测时，由于有多个解链温度，需要多步检测，增加了工作量等。尽管如此，在目前的检测手段中，DHPLC仍是一种快速、高效、准确、经济及半自动化筛查基因杂合突变的工具，优于测序等其他分子生物学方法，相信在未来的基因组学研究领域中必将继续发挥重要的作用。