甲基东莨菪碱和吡啶斯的明对鼠应激性体温过高反应的影响

    1.6  胆碱酯酶的测定

    给药后60 min,即开放实验结束时，用乙醚麻醉大鼠，然后用肝素化的注射器进行心脏穿刺取血。血标本在5℃条件下离心（4 000 r/min,15 min），取血浆存储于-30℃以备测胆碱酯酶。用分光光度法测定血浆中胆碱酯酶的活性，胆碱酯酶测定盒为南京建成生物工程研究所产品。
 

   1.7  统计分析

    实验数据用均数±标准差(±s)表示，采用配对t检验或团体比较t检验进行统计分析。

    2  结果

    2.1  甲基东莨菪碱和吡啶斯的明对大鼠应激性体温过高的影响    所有实验动物给药前体温是相似的，从给药后放入开放环境箱到第一次测量体温（2 min）时，体温降低了约0.1℃。将动物从开放环境箱放回鼠笼可引起短暂的体温升高现象（图1-3）。

    对照组动物放入开放环境箱中体温快速升高达0.8℃,从开放环境箱放回鼠笼体温逐渐恢复，2 h末恢复到正常水平（图1）。给大鼠甲基东莨菪碱后放入开放环境箱中，体温也出现升高现象，但这种体温升高要比给盐水大鼠低，而且稳定的持续于实验全过程。给大鼠甲基东莨菪碱后放入开放环境箱中的体温变化曲线和TRI以及恢复期的体温变化均明显低于对照组大鼠（图1和图4）。

    大鼠皮下注射吡啶斯的明后，立即暴露到开放环境箱中时，体温过高反应与盐水组大鼠比较明显升高，其体温过高反应要比给盐水组高0.4℃左右（P＜0.05)，当放回到原鼠笼时，体温恢复所需要的时间与盐水大鼠相同（图1和图4）。

    但同时给大鼠注射吡啶斯的明和甲基东莨菪碱几乎可以阻断甲基东莨菪碱对开放应激体温过高的抑制作用。大鼠在开放实验箱和恢复期的体温变化与对照组大鼠比较几乎是相似的（图3和图4）。

    2.2  甲基东莨菪碱和吡啶斯的明对大鼠开放实验活动的影响图2  大鼠皮下注射吡啶斯的明置于开放实验箱中体温和活动的时间曲线所有实验动物在开放环境箱中的活动水平均持续高于鼠笼中的活动水平（图1、2和3）。给药物后，将大鼠放入开放环境箱到第一次记录活动（2 min）时，大鼠的活动是突然增加，然后缓慢降低。但是，吡啶斯的明和甲基东莨菪碱对开放实验条件下大鼠的活动与给盐水大鼠比较没有明显影响（图4）。将动物从开放环境箱放回鼠笼可引起短暂的体温升,然后逐渐降低，到2 h末恢复到正常水平（图1、2和3）。

    2.3  血浆胆碱酯酶的活性

    分别给大鼠皮下注射盐水、吡啶斯的明和甲基东莨菪碱后置于开放条件下，血浆中胆碱酯酶(ChE)的活性分别为392±32.8,202.2±28.5和402±37.2U/L。实验证明，吡啶斯的明能使血浆中ChE 的活性明显降低，但甲基东莨菪碱对其没有影响（图5）。

    3  讨论

    啮齿类和其它动物通常要远离开阔而空旷的环境，寻找狭小或者隐匿的安全环境。所以将他们放入宽阔环境时，可以引起交感神经-肾上腺系统兴奋而导致体温升高，以及其他各种生理和行为的反应［2］。在正常室温和冷环境中，开放应激性体温过高反应的幅度是相似的，说明应激性体温过高是调节性体温升高，而不是简单的应激反应本身伴随的代谢变化的结果［4］。我们实验室最近的工作证明，腹腔注射AVP能明显降低大鼠应激性体温过高，而注射AVP V1阻断剂则能提高应激性体温过高的反应，证明内源性AVP在应激性体温过高中有负调节作用［6］。图4  大鼠皮下注射盐水、甲基东莨菪碱、吡啶斯的明或者联合给甲基东莨菪碱和吡啶斯的明后置于开放实验箱中体温和活动的变化

    本实验给大鼠注射外周性毒蕈碱阻断剂甲基东莨菪碱能明显减弱开放应激性体温过高的反应。这个发现表明，外周毒蕈碱型受体参与开放应激性性体温过高反应。但用甲基东莨菪碱阻断外周毒蕈碱型受体的作用，对外周毒蕈碱型受体在开放应激性体温过高中如何发挥作用提供的是一个不完整的解释。如果阻断该受体能减弱体温过高反应，那么激动该受体是否可以提高这种反应？一种不穿过血脑屏障的外周抗胆碱酯酶剂吡啶斯的明，是可以反转甲基东莨菪碱作用的一个理想的实验用药，它可短时间的激动毒蕈碱型和烟碱型受体。

    鉴于甲基东莨菪碱能抑制应激性体温过高，所以进一步研究吡啶斯的明是否能反转甲基东莨菪碱作用，可能有助于了解外周胆碱能神经在应激性体温过高中的作用。作者给大鼠同时注射吡啶斯的明和甲基东莨菪碱后，对开放实验期和实验恢复期大鼠的体温影响与对照组大鼠比较几乎是相似的。这就证明，吡啶斯的明可以阻止甲基东莨菪碱对大鼠开放应激时体温过高的影响。另外，给大鼠皮下注射吡啶斯的明可使血浆CHE活性降低52%，而导致开放应激性体温过高反应发生明显的改变。因而，此实验支持了外周胆碱能神经参与大鼠开放应激性体温过高的调控作用。

    虽然，甲基东莨菪碱可导致暴露到开放环境中动物的体温过高反应明显降低，而吡啶斯的明则可升高应激性体温过高反应，但这两种药物却不影响开放环境中动物的活动。为什么阻断毒蕈碱受体可以减弱应激性体温升高，是迷走胆碱能传出神经纤维还是运动神经胆碱能传出神经纤维激动外周毒蕈碱受体，或者与两者都有关，而导致开放性体温过高反应， 还不完全清楚。但有实验证明，切除大鼠的迷走神经能明显降低应激性体温过高的反应［7］，切除隔下迷走神经可减弱LPS的发热反应［5］。另外也认为，一些重要的细胞因子，如白细胞介素(IL)-l、IL-6和肿瘤坏死因子也参与应激性体温过高的调节［8］。然而，本实验大鼠置于开放环境和给该药所观察的时间范围内，是不可能出现细胞因子相对缓慢的作用。细胞因子的作用机制似乎不能解释本实验中甲基东莨菪碱和吡啶斯的明的作用，因为这两种药对应激性体温过高的影响是非常快速的。

    综上所述，可以认为外周毒蕈碱和其他类型的受体可能在外周水平参与激活应激性体温过高的反应，进一步的工作是研究外周胆碱能神经的兴奋与应激性体温过高之间的相互作用。

【参考文献】
  ［1］Briese E.Normal Body Temperature of Rats:the Setpoint Dontroversy［J］.Neurosci Neurobehav Rev,1998,22:427-436.

［2］Gordon, CJ.Environmental Stress,in:Temperature and Toxicology［M］.CRC Press,New York.2005,195-231.

［3］Briese E.Emotional Hyperthermia and Performance in Humans［J］.Physol Behav,1995,58:615-618.

［4］Long NC.,Vander A.J,Kluger M.J.Stress-induced Rise of Body Temperature in Rats Is the Same in Warm and Cool Environments［J］.Physiol.Behav,1990,47:773-775.

［5］Romanovsky AA,Ivanov AA,Berthoud HR,et al.Are Vagal Efferents Involved in the Fever Response to Intraperitoneal Lipopolysaccharide［J］.J Therm Biol,2000,25:65-70.

［6］Yang Yong-lu.Role of Arginine Vasopressin in Stress-induced Hyperthermia［J］.Chinese Critical Care Medicine,2002,14:207-209.

［7］Gordon CJ,Rowsey PJ.Role of Vagal Afferents in the Mediation of Chlorpyrifos-induced Fever in the Rat［J］.J Therm Biol,2000,25:91-97.

［8］Watkins LR,Goehler LE,Relton JK,et al.Blockade of Interleukin-1 Induced Hyperthermia by Subdiaphragmatic Vagotomy:Evidence for Vagal Mediation of Immune-brain Communication［J］.Neurosci Lett,1995,183:27-31.