HPLC在测定血浆同型半胱氨酸含量中的应用
3 结果
3.1 标准曲线和方法学评价
对不同稀释度的Hcy标准溶液进行衍生处理后测定,结果表明,Hcy浓度在0.48~31.25μg·mL-1范围内,峰面积与浓度之间有良好的线性关系。
在同一份已知含量的血浆样品中加入不同量Hcy,测定方法的回收率。取3份浓度不同的血浆样本,分别测定日内及日间精密度,日内精密度为4.2%,日间精密度为4.4%,回收率结果见表1。
3.2 色谱条件的影响
用在测定血浆氨基酸的流动相的梯度条件下,测定Hcy,尽管也能达到测定目的,但一个样品的测定周期达40min,难以进行批量样品测定。为此,本试验用0.02mol·L-1NaAc (pH=7.20)和乙腈、四氢呋喃不同比例的等梯度洗脱,发现在0.02mol·L-1NaAc(pH=7.20)∶乙腈∶四氢呋喃=56∶43.8∶0.2时等度洗脱可达到最好的分离效果,且在20min内即可完成一个样品测定。该方法准确、简便、快捷,适用于大多数实验室进行实验研究及临床检测。
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