灯盏花颗粒主要药效学试验
【摘要】 目的 应用二道血流速度流量仪超声探头测定大鼠颈总动脉 (结扎颈外动脉) 以反映云南植物药业有限公司提供的灯盏花颗粒对脑血流量的影响;记录小鼠断头后张口喘气时间,观察灯盏花颗粒的抗脑缺血作用。方法 采用Born方法测定灯盏花颗粒在体内外对AA、ADP及PAF诱导的家兔血小板聚集功能的影响;运用电刺激大鼠颈动脉血栓形成方法,评价灯盏花颗粒对血栓形成的阻抑作用。结果 灯盏花颗粒显著增加脑血流量并延长小鼠断头后喘气时间;灯盏花颗粒在体内外均明显抑制AA、ADP及PAF诱导的血小板聚集功能的同时还显著延长电刺激大鼠颈动脉的血栓形成时间。结论 灯盏花颗粒可能通过抗血小板和抗血栓形成等机制来明显增加脑组织的血供,这对保护缺血性脑组织是十分有利的。
【关键词】 灯盏花颗粒 血小板聚集 血栓形成 脑血流量
Pharmacokinetic experiment of Erigeron breviscapus pellets
【Abstract】 Objective The arteria carotis externa was ligated, and arteria carotis interna was kept opening The left carotid artery was exposed and placed over an ultrasonic flow probe. The brain flow volume was recorded with an ultrasonic volume meter. The pursiness time of mice was observed to evaluate the effect of Erigeron breviscapus pellets on cerebral ischemia. Methods Born’s method was used to investigate effects of Erigeron breviscapus pellets on rabbit platelet aggregation induced by adenosine diphosphate (ADP), arachidonic acid (AA), and platelet-activating factor (PAF), in vitro or in vivo. Antithrombotic effects of Erigeron breviscapus pellets was monitored according to Peter’s method. Results The results showed that Erigeron breviscapus pellets significantly increased brain blood flow and prolonged mouse pursiness time; Erigeron breviscapus pellets markedly inhibited ADP-, AA-, or PAF-induced platelet aggregation in vitro or in vivo, and prolonged the occlusion time of electrically-stimulated carotid artery.Conclusion It is suggested that Erigeron breviscapus pellets improved cerebral ischemia and hypoxia due to its antiplatelet and antithrombotic effects. It is obviously advantageous to protect ischemic brain tissue.
【Key words】 erigeron breviscapus pellets platelet aggregation thrombosis brain blood flow
血小板聚集性增高在血栓栓塞性疾病的发生发展过程中起着重要作用[1]。灯盏花[Erigeron breviscapus (Vant.)Hand.-Mazz]是云南省特有的民族药用植物, 民间主要用其防治中风偏瘫等疾病。灯盏花颗粒的主要有效组分是灯盏花总黄酮 (Erigeron reviscapus flavones), 主要成份有灯盏花素、芹菜素、4′-羟基黄芩素等[2]。灯盏花颗粒临床主要用于防治缺血性 (或血栓栓塞性) 脑血管疾病。多年临床实践证明,灯盏花颗粒对脑缺血、脑血栓病等血淤性疾病疗效甚好。为进一步保护该产品,本试验着重研究灯盏花颗粒对大鼠脑血流量、小鼠断头喘气时间的影响,同时测定灯盏花颗粒的抗血小板及抗血栓形成作用,以期为进一步保护和利用该产品提供药效学试验依据。
1 材料
1.1 动物 ICR小鼠及雄性SD大鼠,由云南省天然药物药理重点实验室动物室提供(滇实动证字第9806、9805号);健康家兔,体重2~2.5kg,雌雄均用,均由昆明医学院动物科提供 (滇实动证字第2002082号)。
1.2 药物及试剂 灯盏花颗粒,规格:5g/包(0.6g浸膏/包);试验用药料浸膏,1g浸膏等于4g生药,批号:
20010704,由云南植物药业有限公司提供。复方丹参滴丸,规格:0.25g/粒,批准文号:(95)卫药准字Z-01号,批号:20010117,由天津天士力制药股份有限公司生产。花生四烯酸(arachidonic acid, AA) 和血小板活化因子(platelet activator factor, PAF) 均购自美国Sigma公司,临用前分别用 100mmol/L的 Na2CO3溶液及含0.25%小牛血清蛋白的Tris-NaCl缓冲液稀释。腺苷二磷酸 (adenosine diphosphate,ADP) 系 Fluka 公司产品,以磷酸盐缓冲液溶解备用。
1.3 仪器 SEN-7203型电刺激仪,日本Nihon Kohden公司产品;DVM -4200型二道血流速度流量仪,日本Hayashi Denki公司生产;LBY-NJ2 型血液凝聚仪, 由北京普利生精密仪器研究中心生产。
2 方法与结果
2.1 对大鼠脑血流量的影响[3] 雄性SD大鼠,体重180~220g,随机分为5组,每组8只,即等体积生理盐水组、187.5、375、750mg/kg的灯盏花颗粒组和375mg/kg 的复方丹参滴丸组。大鼠以30mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后,分离颈总动脉并结扎颈外动脉;打开腹腔,找出十二指肠。用二道血流速度流量仪超声探头于近头端测定正常的颈总动脉血流量(此时,颈总动脉的血流量主要反应脑血流量),待平稳后,经十二指肠分别给予上述药物,30min后,同上测量颈总动脉血流量,观察药物对大鼠脑血流量的影响。
结果表明,高、中剂量的灯盏花颗粒及375mg/kg的复方丹参滴丸均明显增加大鼠脑血流量,见表1。
2.2 对小鼠断头后张口喘气时间的影响[3] 体重18~22g的ICR小鼠,雌雄各半,随机分成5组,每组10只,即等体积的生理盐水组、187.5、375、750mg/kg的灯盏花颗粒组和375mg/kg复方丹参滴丸组。实验组按0.2ml/10g灌胃给药,每日1次,连续5天。于末次给药后1h,将小鼠逐只断头,立即按秒表记录小鼠断头后张口喘气停止时间作为抗脑缺血指标,数据以t检验行组间统计学处理。
结果显示,高、中剂量的灯盏花颗粒及复方丹参滴丸均明显延长正常小鼠断头张口喘气时间,见表2。
表1 灯盏花颗粒对大鼠脑血流量的影响 (x±s)
注:n=8,与生理盐水组或给药前比较*P<0.05,**P<0.01
表2 灯盏花颗粒对小鼠断头张口喘气时间的影响 (x±s)(略)
注:n=10,与生理盐水组比较*P<0.05,**P<0.01
2.3 对家兔血小板聚集功能的影响
2.3.1 富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP) 和贫血小板血浆(platelet-poor plasma, PPP)的制备自清醒家兔颈动脉取血收集于塑料离心管中,以3.8%枸橼酸钠抗凝(血与抗凝剂体积比9:1)。于室温下1000r/min离心10min,得PRP,吸出PRP于洁净塑料管中;剩余血液再以3000r/min离心10min得PPP。PPP用于调零或调整PRP中的血小板数目,试验过程中血小板数控制在5×1011cell/L。
2.3.2 血小板聚集性测定 体外试验:将供试品用生理盐水溶解并稀释成不同浓度的药液备用,分别取10μl药液或生理盐水于PRP中,37℃温育10min。按Born氏比浊法[4],即PPP调零及PRP调幅后,分别加入5μl的AA(终浓度0.35mmol/L),ADP(3μmol/L)或PAF(7.2nmol/L),在血小板聚集仪上测定血小板聚集性并记录5min内血小板最大聚集率,血小板聚集抑制率按下式计算: