蝰蛇(缅甸亚种)毒凝血因子Ⅹ激活物FⅤe-1的分离纯化与理化活性的研究

　　1.6 统计学处理

　　所有数据以均数±标准差(x ± s)表示,以SPSS 13.0统计软件包进行统计,组内各参数以t-检验与基础值进行统计学分析,组间检验以单因素方差分析进行统计学分析, 检验水平α=0.05?

　　2 结 果

　　2.1 各组血气参数改变比较

　　各组在体外循环后各时间点■和OI较基础值均显著降低,■显著升高?■ 较基础值显著性升高(P < 0.05)?组间比较,Ⅱ组■和OI较其余两组明显升高,差异有统计学意义(P < 0.05),■较其余两组明显减少,差异有统计学意义(P < 0.05)?详见表1?

　　2.2 各组呼吸力学参数比较

　　各组体外循环后机械通气气道峰压(PIP)与基础值相比,各个时间点均显著升高,差异有统计学意义(P < 0.05)?组间比较,Ⅱ组的气道峰压明显低于其余两组,差异有统计学意义(P < 0.05)?各组肺顺应性(Compliance)与基础值相比,各个时间点均显著降低,差异有统计学意义(P < 0.05)?组间比较,Ⅱ组的肺顺应性明显高于其余两组,差异有统计学意义(P < 0.05)?详见表2?

　　2.3 肺组织光镜结果

　　Ⅰ组肺间质及肺泡毛细血管明显扩张充血,气管壁及毛细血管周围有大量炎性细胞浸润,肺泡隔内亦有炎性细胞浸润(图1A?B)?Ⅱ组肺间质及肺泡毛细血管扩张不明显,有少量的炎性细胞浸润(图1C?D)?Ⅲ组:肺泡腔内见均匀红染的渗出物附着于肺泡壁内,肺毛细血管充血扩张.肺泡腔内有散在红细胞及炎性细胞浸润(图1E?F)?

　　2.4 肺组织电镜结果

　　Ⅰ组有一定数量的板层小体,板层小体有多呈排空状,部分内含少数活性物质;肺泡毛细血管基底膜边缘清晰?完整;有小量的线粒体;有少量圆形胞突;细胞核呈卵圆形,异染色质较多,呈块状(图2A)?Ⅱ组板层小体与对照组相比明显增多,未排空,内含较多活性物质;肺泡毛细血管基底膜边缘清晰?完整;线粒体比对照组明显增多,呈肿胀状态;有少量细长胞突;细胞核呈卵圆形,异染色质较对照组少;糙面内质网增多?扩张(图2B)?Ⅲ组板层小体数量与对照组接近,但体积较小,未排空,内含较多活性物质;肺泡毛细血管基底膜模糊?欠完整;线粒体对对照组多,形态正常(图2C)?

　　3 讨 论

　　近年来虽然CPB技术已经有了明显的改进,并发症逐渐下降,但是CPB术后急性肺功能障碍的发生率仍然高达15%~30%[1]?由于婴幼儿和新生儿肺泡数量相对较少?肺组织相对脆弱?肺泡表面活性物质相对匮乏等等,这使得其肺脏和呼吸功能更易受到损伤因素的影响而发生变化?

　　3.1 CPB相关性肺损伤

　　CPB相关性肺损伤的发生机制主要集中在以下几个环节:①CPB期间肺的缺血再灌注损伤[6](ishchemia-reperfusion injury,I-R)?CPB过程中,肺组织处于缺血?缺氧状态?肺循环恢复后,富含高张力氧的血液进入肺脏,肺部大量积聚的多形核白细胞(polymorphonuclear leucocyte, PMN)可因I-R机制而被激活引发肺损伤;②CPB所致全身性炎症反应:CPB期间,由于手术刺激?血液与CPB应用的非生理性管道接触以及低温等激活补体?PMN等产生多种炎症介质以及细胞因子,如TNF-α?IL-1β等[7],这些因子作为重要的信号因子,可促使许多类型的细胞表达?合成和释放多种细胞趋化因子与黏附分子等如(IL-6,IL-8等),募集PMN进入肺泡腔,造成肺血管内皮的损伤和肺泡毛细血管屏障的通透性增加,导致肺损伤的发生;③机械通气相关性肺损伤:机械通气时肺泡细胞在过度扩张?反复开放与关闭时产生的剪切力的作用下分泌炎症细胞因子如TNF-α?IL-1β等,导致肺损伤?另外在CPB期间,通常将停止机械通气,造成肺的塌陷,在撤除CPB恢复通气后肺才获得复张?研究表明,肺塌陷后再复张可以导致上述炎性细胞因子表达水平上调,并增加肺部毛细血管通透性[8]?本研究在CPB停止机械通气期间,在肺内灌入不同剂量的氟碳化合物,探讨这种液体通气的模式对于预防和减轻CPB后肺损伤,改善肺气体交换能力的作用?

　　3.2 氟碳化合物的肺保护效应

　　液体通气是近年来用于肺保护的新方式,是用PFC替代气体介质来完成氧气和二氧化碳的交换?Fuhrman等[5]提出了PLV将相当于功能残气量(30 mL?kg-1)的PFC灌入肺部后,使用常规的呼吸机维持潮气量,即可以取得充分的气体交换,关于PLV 中PFC的首次用量?注入方式及注入速度人们说法不一[3,5,10]?但有研究表明,小潮气量(7 ~ 13 mL?kg-1)PLV通气模式可能较大潮气量(20 ~ 30 mL?kg-1)对肺的保护效果更佳[11-13]?我们的研究结果证实了在CPB期间应用小剂量组在撤除CPB后肺的氧合功能较对照组和大剂量组明显改善?

　　我们认为在CPB期间应用小剂量氟碳化合物用于CPB肺保护的机理有:①PFC 的高比重特性以及表面活性物质作用, 可以使得CPB期间由于停止机械通气而使得用于处于仰卧位而易不张的下垂部位肺泡其气-液界面被液-液界面所替代,形成液态的PEEP,表面张力降低,避免了CPB后肺不张的发生,可使病变萎陷的肺泡重新开放,这种结构既有利于气体交换,也减少了肺毛细血管的渗出[14]?应用大剂量PFC时,由于受PFC的重力作用,PFC在肺内主要分布于肺损伤较重的下垂部位,使得下垂部位的肺泡组织过度牵拉,造成肺泡间隔破裂,产生局部的肺损伤?我们的研究结果表明应用小剂量的PFC较大剂量组可以显著的改善肺的顺应性,同时肺部的病理检测结果也显示肺泡结构的完整性要好于大剂量组?②肺泡灌洗和抗炎作用:PFC是非常理想的肺灌洗液,可以稀释肺泡渗出物并清除肺内的各种炎症介质?同时多项研究表明PFC具有很强的抗炎作用[15],这一点与其抑制PMN在肺内的募集?减少炎症介质和氧自由基的释放有关?Yoshida的研究[16]表明液体通气可抑制中性粒细胞肺内聚集,并使肺泡灌洗液髓过氧化物酶浓度显著下降,减轻肺内炎症反应?③促进内源性表面活性物质的产生:由于PFC不会被蛋白质灭活,液体建立的呼气末正压可稳定肺泡结构,加上清洗肺泡内蛋白质的作用,有利于内源性表面活性物质的产生和恢复?板层小体是一种由Ⅱ型肺泡细胞分泌的含肺表面活性物质的同心层状结构, 是肺表面活性物质的储存形式?电镜结果显示,小剂量组的板层小体较大剂量组和对照组明显增多?3.3 本研究局限性

　　与一些研究相似[2-4,12],本研究所用的动物模型为健康乳猪的体外循环模型,该模型用于模拟肺功能正常的婴幼儿在体外循环前后肺的氧合功能以及顺应性的变化,但对于术前已经有肺动脉高压或者原有肺损伤的临床条件下进行体外循环,采用这种PLV模式是否同样有肺保护作用还有待进一步研究证实?同时本研究仅观察了肺氧合功能和组织学的改变,研究结果表明CPB期间应用小剂量PLV可以改善健康乳猪CPB后的肺氧合功能,增加肺的顺应性,同时也观察到较对照组和大剂量组肺部病理改变轻微, 证实了小剂量组在CPB期间应用PFC对健康乳猪肺的保护作用,但未对肺内和全身炎症介质释放做一研究,将有必要做进一步研究以阐述相关的机制?

【参考文献】