Y染色体AZF基因缺失检测与男性不育

　　4  Y染色体AZF基因检测方法及临床意义
   
　　目前，针对AZF基因缺失的检测主要采用Y染色体特异性序列标签位点(sequence tagged sites，STS)引物行PCR扩增，检测光镜下分辨不出来的Y染色体微缺失。作为基因物理图谱的STS是一段已知核苷酸序列的DNA片段，可真实反映染色体上不同的基因序列，诊断Y染色体微缺失的基因诊断策略是设计引物对AZFa、AZFb、AZFc 3个区域进行缺失筛查，每个区域选择2～3个STS位点进行PCR扩增，既在同一PCR反应体系中加入数对AZF区域STS引物，如果这些引物的退火温度相近并且所覆盖的区域不重叠，就可以同时扩增一份DNA样品中不同基因位点的不同序列，AZF基因的某一片段则相应的电泳图谱上这一区带就会消失，一旦发现缺失，单独扩增缺失位点以确认［19］。不同的研究者进行Y染色体AZF缺失分析时选用的STS数目有很大的差异，从5～118个不等，检测时应用多少个Y染色体特异性STS位点及其代表性，国际上尚存争议，缺乏统一的标准，但将AZF分为AZFa、AZFb、AZFc 3个区域已被大部分的研究者所接受。欧洲标准化AZF缺失筛查推荐使用3个对照［20］：1份正常男性ＤＮＡ为阳性对照，1份正常女性ＤＮＡ为阴性对照，无菌蒸馏水为空白对照。女性样品用以监控实验结果的特异性和污染情况，水空白对照是用来检测试剂是否被污染。设计的引物包括:sY14(SRY)、ZFX/ZFY、sY84、sY 86、sY 127、sY 134、sY 254、sY 255。采用上述位点可以检测到目前已知的95%以上的Yq微缺失，因此这套设计完全满足常规检测。AZF缺失基因蕊片检测技术是未来发展方向。
 

　　
　　AZF缺失的检测使临床上一些原因不明的无精症或少精症患者从分子水平上明确了病因，为临床医师的诊疗过程提供了临床依据。目前，对无精少精患者生育的有效治疗是单精子卵泡内注射(intracytoplasmic sperm injection，ISCI)，对这一群体的遗传学咨询及筛查是十分必要的：①无精子和少精子存在的遗传学问题如Y染色体微缺失可垂直传给男性后代，可通过术前筛查进行种植前遗传学诊断切断遗传途径。②诊断Y染色体微缺失，找到精子生成障碍的真正原因，从而避免不必要的药物及手术治疗。③诊断无精子症患者Y染色体微缺失的种类，指导睾丸活检。④由于AZFc缺失可能出现随时间进行性精子数量减少的现象［21］，所以携带AZFc缺失的少精症应考虑精液的保存，避免将来不必要的治疗。

　　5  结束语

　　大多数原发性无精子症和原发性严重少精子症病人的Y染色体大体上是完整的，AZF缺失并非一概不育，但Y染色体AZF缺失，可引起严重生精障碍，AZF缺失检测成为诊断遗传性不育的重要技术手段。近年来男性原发性不育患者就诊率的不断升高和辅助生殖技术规模的不断扩大，开展AZF基因缺失检测在临床工作中显得越来越重要。在行AZF检测前应排除以下引起不育的因素:生殖道的感染、染色体数目及结构异常、梗阻性无精子症、精索静脉重度曲张、内分泌激素的异常、免疫性不育及隐睾等先天性发育异常引起的不育症。随着研究的不断深入，将进一步明确各基因型的临床特征，对AZF基因缺失是否存在地域及种族差异，Y染色体基因编码的相关蛋白质都待进一步研究。

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