蒲葵子的体外抗癌活性

　　1.2.2  细胞培养 

　　人肝癌细胞株（HepG2）和人早幼粒细胞白血病细胞株（HL60）由福建医科大学药理研究所冻存提供。HepG2、HL60均培养于含10%小牛血清、青霉素100 IU/mL及链霉素100 μg/mL的RPMI 1640培养基中,每3 d换液1次,每5 d传代1次。细胞均置于37 ℃、体积分数为0.05的CO2、饱和湿度的培养箱中,取对数生长期细胞用于试验。
 

　　　1.2.3  MTT法 

　　取对数生长期HepG2、HL60细胞,以0.25%胰酶-PBS液充分消化后,以RPMI 1640培养基稀释成5×104mL-1单细胞悬液,接种于96孔细胞培养板,每个浓度复种3孔,每孔180 μL。置培养箱温育12 h后,药物组每孔加不同浓度供试液20 μL,平行设空白对照组(用等体积的RPMI 1640培养基代替受试药物),共培养48 h。每孔加入1 mg/mL MTT溶液50 μL,继续培养4 h后,吸尽上清液,每孔加入二甲基亚砜(DMSO)150 μL,充分溶解MTT还原产物。置酶标仪上于492 nm波长处测定各药物组和空白组的光密度(D),按公式计算得到药物对肿瘤细胞生长的抑制率(IR,%)以及半数抑制浓度(IC50),并对药效进行初步的评价。
  IR%=(1-加药组平均D值/对照组平均D值)×100%

　　2  结  果

　　2.1  萃取部位对HepG2细胞的细胞毒性 

　　对HepG2细胞作用48 h后,各萃取部位不同浓度的抑制率呈量效关系。细胞的毒性大小依次为正丁醇>乙酸乙酯>石油醚>氯仿。其中,正丁醇具有较高的细胞毒性,IC50仅为7.94 μg/mL(IC50<20 μg/mL);乙酸乙酯具有一定的细胞毒性(表1)。表1    蒲葵子各萃取部位对HepG2的细胞毒性（略）

　　2.2  萃取部位对HL60细胞的细胞毒性 

　　对HL60细胞作用48 h后,采用MTT法比色法,各萃取部位不同浓度的抑制率呈量效关系(表2)。细胞毒性大小依次为正丁醇>乙酸乙酯>石油醚>氯仿。其中,正丁醇和乙酸乙酯都具有较高的细胞毒性,IC50为10.72和17.78 μg/mL。表2  蒲葵子各萃取部位对HL60的细胞毒性（略）

　　3  讨  论

    蒲葵子在民间被广泛用于治疗各种癌症,其中福建民间将蒲葵子与猪肉一同炖至肉熟烂,饮汤吃肉,用于鼻咽癌、食道癌的治疗。国外文献报道，蒲葵子的水提物对肿瘤血管发生具有较强的抑制作用,且该水提物对人乳腺癌细胞(Mcf-7)、鼠成纤维瘤细胞和人结肠癌细胞(Ht-29)体外抑制作用较强,对成纤维细胞瘤小鼠模型具有较好的治疗效果,未观察到毒副作用;蒲葵子的乙醇提取物(0.1 g/mL)对人白血病细胞HL60生长有较强的抑制作用,IC50为1/50倍的提取液(即2 μg/mL)［3-4］。

    本研究采用MTT法对蒲葵子的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位进行体外抗肿瘤活性筛选研究,结果表明,蒲葵子粗提物的上述各萃取部位对HepG2和HL60细胞有不同程度的抑制作用,均在给药后24 h内效果明显。乙酸乙酯对HepG2和HL60胞的最大抑制率分别达到99.52%和99.59%,正丁醇最大抑制率分别达到96.77%和97.12%,正丁醇部位的IC50分别为7.94和10.72 μg/mL,说明乙酸乙酯部位和正丁醇部位具有明显的体外抗肿瘤活性,且有明显的剂量依赖性。

    本研究为抗肿瘤药物的粗筛,所用的样品为蒲葵子乙醇提取物的各个萃取部位。结果显示,石油醚部位和氯仿部位对HepG2和HL60的作用都不明显。可能是由于石油醚部位和氯仿部位的溶解性稍差,致使有效浓度太低,而其他部位均能达到较好的溶解。这一问题有待进一步研究。

    上述结果提示,在这两个萃取部位(乙酸乙酯部位和正丁醇部位)中可能存在抗癌作用较强的活性成分,因此,有必要对蒲葵子进行系统的物质基础研究。为寻找到构效关系明确的活性单体成分,笔者拟对蒲葵子的各萃取部位进行进一步的植物化学细分工作,深入研究其化学成分及其抗肿瘤作用的特点,为开发出新的抗癌药物奠定基础,也为临床合理用药提供理论依据。

【参考文献】
  　　［1］广州部队后勤部卫生部. 常用中草药手册［M］. 北京:人民卫生出版社, 1969:772-773.

　　［2］赵国平,戴 慎,陈仁寿. 中药大辞典［M］. 下册. 上海:上海科学技术出版社, 2001:2459-2460.

　　［3］Sartippour M R,Liu C,Shao Z M,et al. Livistona extract inhibits angiogenesis and cancer growth［J］. Oncolog Rep, 2001,8(6):1355-1357.

　　［4］Cheueng S,Tai J. In vitro studies of the dry fruit of Chinese fan palm Livistona chinensis［J］. Oncolog Rep, 2005,14(5):1331-1336.

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